La pellicule présente une perforation par image, à la hauteur de l'inter-image. À l'origine, le film présentait des perforations de chaque côté, mais l'apparition du cinéma sonore synchrone rend nécessaire de disposer d'une piste (sonore magnétique ou optique) et a généralisé l'usage du film à perforations sur un seul côté.

La taille de la fenêtre à la prise de vue et la taille de l'image projetée sont comme toujours légèrement différentes. La fréquence standard est de 24 images par seconde. Le rapport d'image standard est 1,37:1. La taille de l'image obtenue à la prise de vue est de 10,22 × 7,42 mm

Actuellement, le film 16 mm est surtout utilisé pour des prises de vues dans le format Super 16 qui donne un rapport d'image de 1,66:1. Ce rapport convient mieux au gonflage en 35 mm et au transfert sur vidéo au format 16:9 (1,78:1). En super 16, on ne peut utiliser que de la pellicule « simple perforation », qui est à peu près la seule disponible aujourd'hui. C'est d'ailleurs pourquoi la pellicule 16 mm mono-perforation vierge est parfois désignée comme « pellicule super 16 ».

À la prise de vue, le cadrage peut être fait en 1,66:1, 1,85:1 ou, même 2,40:1. L'image imprimée lors de la prise de vue a une dimension de 12,39 × 7,49 mm. L'image réellement exploitée dépend du rapport de cadrage :
rapport 1,66:1 : image 12,39 × 7,49 mm,
rapport 1,85:1 : image 12,39 × 6,69 mm,
rapport 2,40:1 : image 12,39 × 5,16 mm.
Abandonné par la plupart des grosses productions, il est toutefois encore utilisé en court-métrage du fait de son coût, ainsi qu'en clip, sans oublier de nombreuses séries et autres téléfilms, du fait de la demande des chaînes pour le format 16:9.